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In vitro development of cloned bovine embryos produced by handmade cloning using somatic cells from distinct levels of cell culture confluence

GERGER, R. P. C.; RIBEIRO, E. S.; FORELL, F.; BERTOLINI, L. R.; RODRIGUES, J. L.; AMBROSIO, C. E.; MIGLINO, M. A.; MEZZALIRA, A.; BERTOLINI, M.
Fonte: FUNPEC-EDITORA Publicador: FUNPEC-EDITORA
Tipo: Artigo de Revista Científica
Português
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The relationship between the level of cell confluence near the plateau phase of growth and blastocyst yield following somatic cell cloning is not well understood. We examined the effect of distinct cell culture confluence levels on in vitro development of cloned bovine embryos. In vitro-matured bovine oocytes were manually bisected and selected by DNA staining. One or two enucleated hemi-cytoplasts were paired and fused with an adult skin somatic cell. Cultured skin cells from an adult Nellore cow harvested at three distinct culture confluence levels (70-80, 80-90, and > 95%) were used for construction of embryos and hemi-embryos. After activation, structures were cultured in vitro as one embryo (1 x 100%) or as aggregates of two hemi-embryos (2 x 50%) per microwell. Fusion, cleavage and blastocyst rates were compared using the chi(2) test. The fusion rate for hemi-embryos (51.4%) was lower than for embryos (67.6%), with no influence of degree of cell confluence. However, blastocyst rates improved linearly (7.0, 17.5, and 29.4%) with increases in cell confluence. We conclude that degree of cell culture confluence significantly influences subsequent embryo development; use of a cell population in high confluence (> 90%) for nuclear transfer significantly improved blastocyst yield after cloning.; FAPESP[06/53822-4]; CAPES/Brazil[0192058]; PAP/CAV-UDESC[2007-2008]

Cell death and lumen formation in spheroids of MCF-7 cells

AMARAL, Jonatas Bussador do; URABAYASHI, Marcel Shiniti; MACHADO-SANTELLI, Glaucia Maria
Fonte: ACADEMIC PRESS LTD- ELSEVIER SCIENCE LTD Publicador: ACADEMIC PRESS LTD- ELSEVIER SCIENCE LTD
Tipo: Artigo de Revista Científica
Português
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55.93%
3D (three-dimensional) cell culture permits a more integrated analysis of the relationship between cells, inserting them into a structure more closely resembling the cellular microenvironment in vivo. The development of in vitro parameters to approximate in vivo 3D cellular environments makes a less reductionist interpretation of cell biology possible. For breast cells, in vitro 3D culture has proven to be an important tool for the analysis of luminal morphogenesis. A greater understanding of this process is necessary because alterations in the lumen arrangement are associated with carcinogenesis. Following lumen formation in 3D cell culture using laser scanning confocal microscopy, we observed alterations in the arrangement of cytoskeletal components (F-actin and microtubules) and increasing levels of cell death associated with lumen formation. The formation of a polarized monolayer facing the lumen was characterized through 3D reconstructions and the use of TEM (transmission electron microscopy), and this process was found to occur through the gradual clearing of cells from the medullary region of the spheroids. This process was associated with different types of cell death, such as apoptosis, autophagy and entosis. The present study showed that changes in the extracellular matrix associated with long periods of time in 3D cell culture lead to the formation of a lumen in MCF-7 cell spheroids and that features of differentiation such as lumen and budding formation occur after long periods in 3D culture...

Desenvolvimento de formulações iontoforéticas semi-sólidas para o tratamento de tumores cutâneos: estudo 'in vitro' em cultura de células tumorais; Development of semi-solid iontophoretic formulations for treatment of cutaneous tumor: in vitro studies on tumor cell culture.

Taveira, Stephânia Fleury
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 23/03/2007 Português
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O objetivo deste trabalho foi estudar a permeação iontoforética da Doxorrubicina (DOX) em formulações semi-sólidas e testar a citotoxicidade destas formulações em cultura de células de melanoma com e sem a aplicação de corrente elétrica de baixa intensidade. O estudo de liberação da DOX das formulações (gel de Hidroxietilcelulose ? HEC, gel de quitosana e solução aquosa) mostrou que o gel de quitosana possuiu uma velocidade de liberação quase três vezes maior do que nas demais formulações. Os estudos de permeação passiva mostraram que o fármaco não atravessa a pele em quantidades detectáveis. No entanto, a iontoforese contribui significativamente não só na permeação da DOX, mas também na sua retenção cutânea. O gel de HEC foi o que levou a uma maior retenção cutânea do fármaco em comparação com as demais formulações. Nos estudos de citotoxicidade realizados em células de melanoma de camundongos, verificou-se que as formulações contendo DOX possuíram citotoxicidade maior comparadas ao controle (solução de DOX). Isso significa que os componentes de cada formulação contribuem no poder de citotoxicidade contra as células de melanoma. A solução de monoleína 5% em propilenoglicol apresentou maior atividade citotóxica dentre todas as formulações estudadas. Seus componentes...

Aplicação do óleo de buriti no desenvolvimento de emulsões e estudo da citotoxicidade e potencial foto-protetor em cultivo celular; Application of Buriti oil (Mauritia flexuosa) on emulsions development and cytotoxic and photoprotector potential evaluation in cell culture.

Zanatta, Cinthia Fernanda
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 07/05/2008 Português
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65.79%
Nos últimos anos intensificou-se o estudo sobre sistemas criados para veicular princípios ativos, como nanoemulsões, dispersões contendo cristais líquidos e emulsões múltiplas, bem como o emprego de matérias-primas da biodiversidade brasileira na produção destes sistemas, a exemplo dos óleos de andiroba, copaíba, urucum e buriti, cuja fruta amazônica é rica em micro-nutrientes com propriedades anti-oxidante, hidratante e fotoprotetora. Durante o desenvolvimento de novas formulações cosméticas, o potencial de irritação dérmica deve ser investigado antes que o produto seja disponibilizado ao consumidor, a fim de identificar compostos que possam causar reações adversas na pele. O objetivo deste trabalho foi avaliar cientificamente o emprego do óleo de buriti na obtenção de emulsões contendo cristais líquidos, nanoemulsões e emulsões múltiplas estáveis e estudar o possível potencial citotóxico e fotoprotetor destas formulações em culturas de células epidérmicas (fibroblastos e queratinócitos), bem como o potencial irritante em modelo organotípico (HET-CAM). Foi estabelecido como valor de EHL crítico igual a 7,25 e selecionados dois pares de tensoativos (Steareth-2 associado aos Ceteareth- 5 e Ceteareth-20) para produção das macroemulsões contendo cristal líquido pela técnica do diagrama ternário. Os testes preliminares em centrifuga...

Cultivo e irradiação de fibroblastos humanos em meio enriquecido com lisado de plaquetas para obtenção de camada de sustentação em cultura de células de epiderme; Cultivation and irradiation of human fibroblasts in a medium enriched with platelet lysate for obtaining feeder layer in epidermal cell culture

Yoshito, Daniele
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 14/03/2011 Português
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Por mais de 30 anos, a utilização do meio de cultura, enriquecido com soro bovino, e de fibroblastos murinos, com a taxa de proliferação controlada por irradiação ou por ação de drogas anti-cancerígenas, vem desempenhando com sucesso o seu papel de auxiliar no desenvolvimento dos queratinócitos em cultura, para fins clínicos. Porém, atualmente há uma preocupação crescente acerca da possibilidade de transmissão de príons e virose animais, aos pacientes transplantados. Levando em conta esta preocupação, o presente trabalho tem como objetivo cultivar fibroblastos humanos em meio enriquecido com lisado de plaquetas humanas e determinar a dose de irradiação dessas células, para obtenção da camada de sustentação na cultura de células da epiderme. Para realização do objetivo proposto, padronizamos a lise das plaquetas, utilizamos este lisado para cultivar os fibroblastos humanos e verificamos a dose de irradiação suficiente para inibir sua duplicação. Queratinócitos humanos foram cultivados nestas camadas de sustentação, em meio de cultura suplementado com o lisado. Com os resultados obtidos concluímos que o lisado de plaquetas a 10% promoveu uma melhor adesão e proliferação dos fibroblastos humanos e em todas as doses testadas (60 a 300 Gy)...

Análise da cinética de replicação do parvovírus canino em cultivo de células CRFK através da PCR em tempo real; Evaluation of the replication kinetic of canine parvovirus in CRFK cell culture using real-time PCR

Silva, Alexandra Rosa da
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 05/09/2011 Português
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No presente estudo, foi inicialmente padronizada uma PCR para detecção do DNA viral da semente de Parvovírus Canino utilizado na vacina brasileira Imunovet® (VR-953TM), tendo como alvo o gene VP2. O produto de PCR foi submetido ao seqüenciamento a fim de caracterizar geneticamente a semente vacinal. A seguir, foi padronizada uma reação de PCR em tempo real (RT-PCR) para detecção de um fragmento de 119 pb do gene VP2, a qual foi empregada para avaliar a cinética de replicação da amostra vacinal do CPV em diferentes métodos e tempos de cultivo celular. A correlação entre os resultados do título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi avaliado pelo Coeficiente de Correlação de Pearson. A PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 457 DICC50/mL. O seqüenciamento do produto de PCR revelou que a amostra vacinal é do tipo CPV-2. A RT-PCR padronizada apresentou uma sensibilidade analítica de 1030 cópias de DNA/mL e uma boa especificidade analítica, pois não detectou o DNA de Adenovírus canino tipos 1 e 2 e Herpesvírus Equino tipo 1. A RT-PCR exibiu Coeficientes de Variação de triplicatas intra-ensaio de 0,43% e inter-ensaio de 0,29%. O Coeficiente de Correlação de Pearson entre o título infeccioso das amostras virais e o número de cópias obtido na RT-PCR foi de 0...

Desenvolvimento de culturas tridimensionais de células e sua aplicação na avaliação de biocompatibilidade de materiais poliméricos; Development of three-dimensional cell cultures and their application on evaluation of polymeric materials biocompatibility

Santos, Glaucia Cristina Mello
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 23/10/2012 Português
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Materiais poliméricos têm sido usados em um vasto número de aplicações médicas e farmacêuticas, caracterizando-se como biomateriais. Antes do uso humano, se faz necessário uma criteriosa programação de testes que permitam investigação da segurança do material e avaliação da eficácia e assim, avaliar sua biocompatibilidade. Essa atenção também tem sido aplicada a materiais nanoparticulados, inclusive de constituição polimérica. Sendo assim, antes da liberação destes materiais para uso humano, testes preliminares são feitos in vitro e in vivo, neste caso com experimentação animal. Paralelamente à crescente busca em se manter a segurança biológica, a ciência tem procurado metodologias alternativas para se obter resultados seguros e que possam substituir os obtidos in vivo. Neste contexto, surge grande interesse no uso de culturas celulares, primeiramente em monocamadas e posteriormente, o desenvolvimento de culturas celulares em estrutura tridimensional, mimetizando de maneira mais próxima o que ocorre in vivo. Considerando as diversas vantagens obtidas no estudo de culturas tridimensionais, este estudo teve como objetivo desenvolver tal modelo, visando simular sistemas de avaliação para biocompatibilidade de materiais poliméricos...

Estudo da distribuição de doses limiares em TFD para um modelo de cultura tridimensional de células obtido pelo método de levitação magnética; Study of the threshold doses distribution in PDT using the three-dimensional cell cultures obtained by the method of magnetic levitation

Sabino, Luis Gustavo
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 21/10/2014 Português
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Um conceito central na dosimetria da terapia fotodinâmica (TFD) é o limiar de dose (Dth do inglês threshold dose). O Dth é definido como a quantidade mínima de luz que deve ser absorvida pelas moléculas de fotossensibilizador (FS) dentro das células malignas a serem tratadas para que ocorra a morte celular por necrose ou apoptose. Os resultados do estudo da captação de FS por células Hep G2 demonstraram que uma população celular de linhagem, cultivada em monocamada, apresenta captação de Photogem (PG) heterogênea, ou seja, algumas células têm maior capacidade de captar moléculas de PG, outras células captam o PG em menor quantidade. A captação heterogênea de PG pode ser a causa para fenômenos de seleção de células mais resistentes à TFD. É razoável supor que as subpopulações celulares de uma mesma massa de células malignas possam apresentar diferentes valores de Dth. Definiu-se uma função de distribuição das doses limiares (g()) como uma função de distribuição gaussiana, e para a sua parametrização desenvolveu-se um método para o cultivo in vitro de culturas tridimensionais (culturas 3D), mais fidedignas ao tecido neoplásico maligno que as culturas tradicionais. Utilizando-se o método de levitação magnética (MLM) e o método de impressão magnética (MIM) para a dosimetria da TFD...

Modificação de superfícies para o uso em cultura de células; Surface modification for use in cell culture

Araujo, Wagner Wlysses Rodrigues de
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 16/12/2014 Português
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O projeto de novos materiais para aplicações tecnológicas em biomateriais e bioengenharia é altamente dependente de como as células aderem à superfície de um material. A adesão e crescimento em biomateriais depende de propriedades do substrato, tais como molhabilidade da superfície, a topografia e a composição química de superfície. O objetivo deste estudo foi investigar as interações de diversos materiais com culturas celulares de células epitelial CHO (Ovário de Hamster Chinês). Os materiais utilizados foram SU-8 2005 (elétron-resiste, Microchem), PDMS (Poli (dimetil siloxano), Down Corning), DLC (Diamond-like Carbon) e vidro foi utilizado como referência. Superfícies de vidro, SU-8, PDMS e DLC lisas (planas) e isentas de modificação ou tratamento específico foram avaliadas quanto ao cultivo de células CHO. Valores médios dos fatores de forma (Ff) de 450 células foram calculados para cada uma das culturas realizadas sobre os 4 substratos. Foram obtidos Ff próximos a 0,52 para o vidro, o SU-8 liso e o DLC, demonstrando um bom espraiamento das células nessas superfícies. A superfície de PDMS apresentou valor unitário para o fator de forma (Ff), que está relacionado a um baixo espraiamento das células. A energia de superfície (ES) obtida para o PDMS é compatível com o resultado de fator de forma (Ff)...

Callus cell culture of Pothomorphe umbellata (L.) under stress condition leads to high content of peroxidase enzyme

Khalil, N. M.; Mello, M. A. M.; França, S. C.; Oliveira, L. A. A.; Oliveira, O. M. M. F.
Fonte: Editora Unesp Publicador: Editora Unesp
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 61-65
Português
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Pothomorphe umbellata (L.), conhecida no Brasil como caapeba, possui diversos usos na medicina popular, sendo estudada especialmente em relação a sua atividade farmacológica. A atividade especifica da peroxidase (unidade/ mg proteina) foi determinada em amostras de callus (cultura de células) de P. umbellata, crescidos em dois tipos de meio MS (meio 1 e meio 2), sob condição de fotoperiodo de 16 horas ou mantidas no escuro (condições de estresse). Pela curva de velocidade de crescimento da cultura de células amostras do meio 2, sob fotoperiodo, apresentaram o melhor índice de crescimento, seguido de amostras do mesmo meio mantidas em condições de estresse. Os resultados também mostraram que a cultura de células crescidas sob condições de estresse levou a um aumento expressivo da quantidade da enzima peroxidase (aumento de 700%). Os valores das constantes cinéticas determinadas foram 3,3mmol.L-1 e 2,8 sec-1, respectivamente, para kM e v max, usando guaiacol como substrato.; Pothomorphe umbellata (L.) known on Brazil as Caapeba has a number of popular medicinal use, and it has been studied in relation to its pharmacological activity. Peroxidase specific activity (units/mg protein) was evaluated in callus cell culture samples of the P.umbellata...

Fine needle aspiration biopsy to reestablish cell culture in an animal model of uveal melanoma

Correa,Zelia Maria da Silva; Marshall,Jean-Claude; Souza Filho,João Pessoa; Odashiro,Alexandre Nakao; Burnier, Jr.,Miguel Noel
Fonte: Conselho Brasileiro de Oftalmologia Publicador: Conselho Brasileiro de Oftalmologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/08/2009 Português
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65.92%
PURPOSE: To access the reliability of fine-needle aspiration biopsy in harvesting a sufficient amount of viable melanoma cells to establish a cell culture and maintain a melanoma cell line from an animal model of uveal melanoma. METHODS: For this study, fifteen male New Zealand albino rabbits had their right eye surgically inoculated with uveal melanoma cell line 92.1. The animals were immunosupressed with cyclosporine A using a dose schedule previously published. The animals were followed for 12 weeks. Intraocular tumor growth was monitored weekly by indirect ophthalmoscopy. After the fourth week, one animal was sacrificed per week preceded by fine-needle aspiration biopsy using a sharp 25-gauge, 1-inch long needle. Two separate aspirates were made from different areas of the tumor. Each aspirate was flushed to a separate cell culture media and sent for cell culture. The cells were frozen after two weeks when there were at least 1 million cells, which is enough to maintain a cell line. Cells were defrosted for HMB-45 immuno-stains to confirm the melanoma origin. RESULTS: Cell growth was observed from the samples harvested from 11 out of the 15 animals inoculated with uveal melanoma. All cell cultures, after defrost, immunoassayed positive for HMB-45. CONCLUSION: Fine needle aspiration biopsy seems to be a reliable method to harvest cells from solid intraocular melanomas in an animal model...

Kinetics of growth of Leishmania (Leishmania) chagasi cycle in McCoy cell culture

Nogueira,Yeda L.; Nakamura,Paulo M.; Galati,Eunice A. B.
Fonte: Instituto de Medicina Tropical Publicador: Instituto de Medicina Tropical
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/12/2006 Português
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The kinetics of growth of Leishmania performed in vitro after internalization of the promastigote form in the cell and the occurrence of the transformation of the parasite into the amastigote form have been described by several authors. They used explants of macrophages in hamster spleen cell culture or in a human macrophage lineage cell, the U937. Using microscopy, the description of morphologic inter-relationship and the analysis of the production of specific molecules, it has been possible to define some of the peculiarities of the biology of the parasite. The present study shows the growth cycle of Leishmania chagasi during the observation of kinetic analysis undertaken with a McCoy cell lineage that lasted for a period of 144 hours. During the process, the morphologic transformation was revealed by indirect immunofluorescence (IF) and the molecules liberated in the extra cellular medium were observed by SDS-PAGE at 24-hour intervals during the whole 144-hour period. It was observed that in the first 72 hours the promastigote form of L. chagasi adhered to the cell membranes and assumed a rounded (amastigote-like) form. At 96 hours the infected cells showed morphologic alterations; at 120 hours the cells had liberated soluble fluorescent antigens into the extra cellular medium. At 144 hours...

Callus cell culture of Pothomorphe umbellata (L.) under stress condition leads to high content of peroxidase enzyme

Khalil,N. M.; Mello,M. A. M.; França,S. C.; Oliveira,L. A. A.; Oliveira,O. M. M. F.
Fonte: Fundação Editora da Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho - UNESP Publicador: Fundação Editora da Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho - UNESP
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2006 Português
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65.84%
Pothomorphe umbellata (L.) known on Brazil as Caapeba has a number of popular medicinal use, and it has been studied in relation to its pharmacological activity. Peroxidase specific activity (units/mg protein) was evaluated in callus cell culture samples of the P.umbellata, grown in two different MS medium (media 1 and media 2), submitted to 16 hours photoperiod or kept in darkness. Cell growth rate curve showed that the best growth indices were observed when media 2 submitted to the photoperiod regime was used, followed by the same media kept in darkness (stress condition). The results obtained also showed that the cell culture grown under stress conditions (darkness) lead to high content of peroxidase enzyme (an increase of 700% was observed). Kinetic constant values of 3.3 mmol.L-1 and 2,8 sec-1 were obtained for kM and v max,, respectively, using guaiacol as enzyme substrate.

Effect of actinomycin D on simian rotavirus (SA11) replication in cell culture

Stefanelli,C.C.; Castilho,J.G.; Botelho,M.V.J.; Linhares,R.E.C.; Nozawa,C.M.
Fonte: Associação Brasileira de Divulgação Científica Publicador: Associação Brasileira de Divulgação Científica
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/04/2002 Português
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65.79%
Rotaviruses are the major cause of viral diarrhea in humans and animals. Actinomycin D (Act D) is an antibiotic that intercalates DNA and therefore inhibits DNA-dependent transcription. The current study was carried out to assess the influence of Act D on the replication of simian rotavirus (SA11) in cell culture. Virus-infected MA-104 cell cultures were studied in the presence of Act D at concentrations of 1.25 and 2.5 µg/ml. Treatment of rotavirus-infected cells with 2.5 µg/ml Act D 48 h post-infection reduced the cytoplasmic metachromasia after staining with acridine orange by 25%. Viral RNA labeled with ³H-uridine in the presence of the drug was separated by polyacrylamide gel electrophoresis. Viral RNA replication was not affected by Act D, but increased ³H-uridine uptake was demonstrable by infected cells in the presence of the drug. This possibly was due to the inhibition of cellular RNA synthesis by Act D, which thus enhances incorporation of the radionuclide into the viral RNA. Act D reduced the number of infected cells presenting virus-specific fluorescence 48 h post-infection by more than 50%. These data suggest that Act D may have complexed with viral RNA and prevented newly synthesized mRNA from being translated, but may not have prevented early replication.

Establishing a stem cell culture laboratory for clinical trials

Sekiya,Elíseo Joji; Forte,Andresa; Kühn,Telma Ingrid Borges de Bellis; Janz,Felipe; Bydlowski,Sérgio Paulo; Alves,Adelson
Fonte: Associação Brasileira de Hematologia e Hemoterapia e Terapia Celular Publicador: Associação Brasileira de Hematologia e Hemoterapia e Terapia Celular
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/01/2012 Português
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65.87%
Adult stem/progenitor cells are found in different human tissues. An in vitro cell culture is needed for their isolation or for their expansion when they are not available in a sufficient quantity to regenerate damaged organs and tissues. The level of complexity of these new technologies requires adequate facilities, qualified personnel with experience in cell culture techniques, assessment of quality and clear protocols for cell production. The rules for the implementation of cell therapy centers involve national and international standards of good manufacturing practices. However, such standards are not uniform, reflecting the diversity of technical and scientific development. Here standards from the United States, the European Union and Brazil are analyzed. Moreover, practical solutions encountered for the implementation of a cell therapy center appropriate for the preparation and supply of cultured cells for clinical studies are described. Development stages involved the planning and preparation of the project, the construction of the facility, standardization of laboratory procedures and development of systems to prevent cross contamination. Combining the theoretical knowledge of research centers involved in the study of cells with the practical experience of blood therapy services that manage structures for cell transplantation is presented as the best potential for synergy to meet the demands to implement cell therapy centers.

Detection of poliovirus type 2 in oysters by using cell culture and RT-PCR

Vinatea,Cecília E.B.; Sincero,Thaís C.M.; Simões,Claúdia M.O.; Barardi,Célia R.M.
Fonte: Sociedade Brasileira de Microbiologia Publicador: Sociedade Brasileira de Microbiologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/03/2006 Português
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65.8%
Shellfish are readily contaminated with viruses present in water containing sewage due to the concentrating effect of filter feeding. Enteroviruses are generally used as a model for the detection of viruses from shellfish due to their public health significance. In the present work, oysters were placed in glass aquaria containing seawater plus unicellular algae. Two experiments were performed: 1) oysters bioaccumulating four different poliovirus type 2 concentrations: 5 x 10(4), 2.5 x 10(4), 5 x 10³ and 5 x 10² PFU/mL during 20h; 2) oyster tissues directly inoculated with 6.0 x 10(5) and 1.0 x 10(5) PFU/mL. After viruses seeding, tissue samples were processed by an adsorption-elution-precipitation method. Positive controls were performed by seeding 6.0 x 10(5) PFU/mL of poliovirus type 2 directly on the final oyster tissue extracts. Oyster extracts were assayed for viruses recovery by plaque assay, RT-PCR and integrated cell culture-PCR methodologies (ICC/PCR). The last one was based on the inoculation of the samples onto VERO cell monolayer followed by RT-PCR analysis of the infected cell fluid. In the first experiment (20h bioaccumulation) until 5 x 10³ PFU were detected after 24 and 48h growth on VERO cells. Direct RT-PCR and ICC/PCR were able to detect 3 and 0.04 PFU of poliovirus...

Stable Growth of Wild-Type Hepatitis A Virus in Cell Culture

Konduru, Krishnamurthy; Kaplan, Gerardo G.
Fonte: American Society for Microbiology Publicador: American Society for Microbiology
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em /02/2006 Português
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55.92%
Human wild-type (wt) hepatitis A virus (HAV), the causative agent of acute hepatitis, barely grows in cell culture and in the process accumulates attenuating and cell culture-adapting mutations. This genetic instability of wt HAV in cell culture is a major roadblock to studying HAV pathogenesis and producing live vaccines that are not overly attenuated for humans. To develop a robust cell culture system capable of supporting the efficient growth of wt HAV, we transfected different cell lines with in vitro RNA transcripts of wt HAV containing the blasticidin resistance gene. Blasticidin-resistant colonies grew only in transfected Huh7 cells and produced infectious virus. HAV was genetically stable in Huh7 cells for at least nine serial passages and did not accumulate attenuating or cell culture-adapting mutations. Treatment with alpha interferon A/D cured the blasticidin-resistant Huh7 cells of the HAV infection. The cured cells, termed Huh7-A-I cells, did not contain virus or HAV antigens and were sensitive to blasticidin. Huh7-A-I cells were more permissive than parental cells for wt HAV infection, including a natural isolate from a human stool sample, and produced 10-fold-more infectious particles. This is the first report of a cell line that allows the genetically stable growth of human wt HAV. The viral vectors and cells described here should allow better insight into the pathogenesis of HAV and the development of attenuated vaccines. The cell lines susceptible to wt HAV growth may also be used to detect and isolate infectious virus from patient and environmental samples.

Cell-line Engineering of Chinese Hamster Ovary Cells for Low-temperature Culture

Kiat, Tan Hong; Yap, Miranda G.S.; Wang, Daniel I.C.
Fonte: MIT - Massachusetts Institute of Technology Publicador: MIT - Massachusetts Institute of Technology
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 14730 bytes; application/pdf
Português
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55.94%
Developments in mammalian cell culture and recombinant technology has allowed for the production of recombinant proteins for use as human therapeutics. Mammalian cell culture is typically operated at the physiological temperature of 37°. However, recent research has shown that the use of low-temperature conditions (30-33°) as a platform for cell-culture results in changes in cell characteristics, such as increased specific productivity and extended periods of cell viability, that can potentially improve the production of recombinant proteins. Furthermore, many recent reports have focused on investigating low-temperature mammalian cell culture of Chinese hamster ovary (CHO) cells, one of the principal cell-lines used in industrial production of recombinant proteins. Exposure to low ambient temperatures exerts an external stress on all living cells, and elicits a cellular response. This cold-stress response has been observed in bacteria, plants and mammals, and is regulated at the gene level. The exact genes and molecular mechanisms involved in the cold-stress response in prokaryotes and plants have been well studied. There are also various reports that detail the modification of cold-stress genes to improve the characteristics of bacteria or plant cells at low temperatures. However...

A phase-segregated model for plant cell culture: the effect of cell volume fraction

Zhang, W.; Furusaki, S.; Middelberg, A.
Fonte: Universidade de Adelaide Publicador: Universidade de Adelaide
Tipo: Artigo de Revista Científica
Publicado em //1998 Português
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65.84%
Plant cells are characterized by low water content, so the fraction of cell volume (volume fraction) in a vessel is large compared with other cell systems, even if the cell concentrations are the same. Therefore, concentration of plant cells should preferably be expressed by the liquid volume basis rather than by the total vessel volume basis. In this paper, a new model is proposed to analyze behavior of a plant cell culture by dividing the cell suspension into the biotic- and abiotic-phases. Using this model, we analyzed the cell-growth and the alkaloid production by Catharanthus roseus. Large errors in the simulated results were observed if the phase-segregation was not considered.; Wei Zhang, Shintaro Furusaki, Anton P. J. Middelberg

Einfluss von thrombocytären Wachstumsfaktoren, einer Keimsuspension mit S. Aureus und Antiproteasen auf das Wachstumsverhalten von Fibroblasten in der Zellkultur; Influence of platelet growth factors, of a bacterial suspension containing S. aureus and antiproteases on the growing of fibroblast cells in cell culture

Holl, Patrick Michael Enno
Fonte: Universidade de Tubinga Publicador: Universidade de Tubinga
Tipo: Dissertação
Português
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Chronische Wunden sind seit langem Objekt klinischer Forschung und zahlreicher Studien. Autologe thombozytäre Wachsumtsfaktoren werden zur Behandlung chronischer Wunden eingesetzt, ihre Wirkung wurde in Studien belegt. Bei einem Teil der behandelten Patienten konnte jedoch keine Wirkung festgestellt werden. Ziel dieser Studie war die Erforschung des Einflusses von autologen thrombozytären Wachstumsfaktoren, bakteriellen Proteasen in einer definierten Keimlösung , definierten Antiproteasen auf in vitro kultivierte humane Fibroblasten. Es zeigte sich ein signifikanter positiver Effekt von thrombozytären Wachstumsfaktoren auf die Fibroblastenkultur. In einer Konzentration von 1/20 zum Standardmedium zugegeben stieg die Zellzahl der Kultur nach 1 Woche auf das 2,5 fache der Kontrollkultur. In einer Konzentration von 1/10 zugegeben führten die Wachstumsfaktoren zu einem 3,5 fachem Anstieg. Untersuchtes Wundexsudat einer chronischen Wunde zeigte unter sterilen Bedingungen keine signifikante Wirkung auf die Vermehrung der Fibroblasten. Definierte Keimlösungen des Keims Staphyloccocus aureus ATC25322 zeigten, 1 /10 zum Standardmedium zugegeben einen signifikant negativen Einfluss auf die Zellzahl der Kultur nach 1 Woche, sowohl bei der Kontrollkultur als auch bei mit Wachstumsfaktoren angezüchteten Kulturen. Aprotinin hatte...