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HE-TAIL PCR, a powerfull tool for identification of Trichoderma harzianum lip1 gene

Jorge, Lurdes; Gonzalez, Francisco J.; Monte, Enrique; Choupina, Altino
Fonte: Instituto Politécnico de Bragança Publicador: Instituto Politécnico de Bragança
Tipo: Conferência ou Objeto de Conferência
Português
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69.623525%
Selected comunication. Oral presentation.; Trichoderma harzianum is a widespread soil fungus, known as a biocontrol agent against soilborne plant pathogens. Species of Trichoderma are commercially applied as biological control agents against plant fungal pathogens based on different mechanisms, such as antibiosis, competition for nutrients and mycoparasitism. One of the mechanisms involved is the production of several lytic enzymes. In T. harzianum has been identified several glucanases, celulases, chitinases and proteases, but nothing are already known about its lipolytic system. In this work we described the identification of lip1 from T. harzianum, a gene encoding the first extracellular triacylglicerol lipase known in this specie. A cDNA library of T. harzianum CECT 2413 cloned in pBluescript SK+ was screened, and the expressed sequence tags (ESTs) with more similarity against lipase gene sequences in international databases selected and sequenced. Elucidation of complete gene nucleotide sequence of lip1, including 52 bp of the open reading frame at the N-terminal region and 693 bp of the promoter region were achieved by high-efficiency thermal asymmetric interlaced (HE-TAIL) PCR (Michiels et al., 2003), which confirmed to be a powerful tool to identify flanking regions from short known sequences. Lip1 codifies a 558 amino acids protein...

Caracterização do gene LIP2 de Trichoderma harzianum

Vaz, Madalena
Fonte: Instituto Politécnico de Bragança, Escola Superior Agrária Publicador: Instituto Politécnico de Bragança, Escola Superior Agrária
Tipo: Dissertação de Mestrado
Português
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69.952305%
Os fungos do género Trichoderma abrangem um grupo de fungos extremamente comuns em solos de todas as zonas climáticas. São eficientes produtores de enzimas com aplicações industriais, ou na natureza, estando envolvidos na degradação da parede celular dos fitopatogénios bem como na degradação de outros fungos, matéria orgânica e nutrientes secretados pelas raízes. As estirpes de Trichoderma produzem enzimas extracelulares e antibióticos com efeitos antifúngicos, sobretudo T. harzianum, T. virens e T. viride, sendo por isso usados como agentes de biocontrolo. De entre as enzimas de degradação das paredes celulares produzidas, encontram-se β-1,3 e β-1,6 glucanases, quitinases e proteases. Pensa-se que também as lipases poderão estar envolvidas na actividade enzimática de biocontrolo. Este trabalho teve como objectivo a caracterização do gene lip2 de Trichoderma harzianum, para isso recorreu-se a um conjunto de ferramentas de biologia molecular, bem como o recurso a programas bioinformáticos, de forma a efectuar a caracterização do gene, contribuindo assim para um melhor conhecimento deste. Procedeu-se à clonagem do gene lip2 num sistema de expressão, usando o vector pET-28a(+), e à avaliação da expressão da proteína lip2 por gel de SDS-PAGE em diferentes tempos de indução. Os resultados obtidos na clonagem indicaram uma banda total de 6584pb o que comprovou o sucesso da clonagem. A expressão da proteína após 8 horas de indução manifestou-se pela presença de uma banda de peso molecular estimado de 44kDa...

Purification, and Biochemical and Biophysical Characterization of Cellobiohydrolase I from Trichoderma harzianum IOC 3844

COLUSSI, Francieli; SERPA, Viviane; DELABONA, Priscila da Silva; MANZINE, Livia Regina; VOLTATODIO, Maria Luiza; ALVES, Renata; MELLO, Bruno Luan; PEREIRA JR., Nei; FARINAS, Cristiane Sanches; GOLUBEV, Alexander M.; SANTOS, Maria Auxiliadora Morim; POLIKA
Fonte: KOREAN SOC MICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY Publicador: KOREAN SOC MICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY
Tipo: Artigo de Revista Científica
Português
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69.42456%
Because of its elevated cellulolytic activity, the filamentous fungus Trichoderma harzianum has a considerable potential in biomass hydrolysis applications. Trichoderma harzianum cellobiohydrolase I (ThCBHI), an exoglucanase, is an important enzyme in the process of cellulose degradation. Here, we report an easy single-step ion-exchange chromatographic method for purification of ThCBHI and its initial biophysical and biochemical characterization. The ThCBHI produced by induction with microcrystalline cellulose under submerged fermentation was purified on DEAE-Sephadex A-50 media and its identity was confirmed by mass spectrometry. The ThCBHI biochemical characterization showed that the protein has a molecular mass of 66 kDa and pi of 5.23. As confirmed by small-angle X-ray scattering (SAXS), both full-length ThCBHI and its catalytic core domain (CCD) obtained by digestion with papain are monomeric in solution. Secondary structure analysis of ThCBHI by circular dichroism revealed alpha-helices and beta-strands contents in the 28% and 38% range, respectively. The intrinsic fluorescence emission maximum of 337 nm was accounted for as different degrees of exposure of ThCBHI tryptophan residues to water. Moreover, ThCBHI displayed maximum activity at pH 5.0 and temperature of 50 degrees C with specific activities against Avicel and p-nitrophenyl-beta-D-cellobioside of 1.25 U/mg and 1.53 U/mg...

Effect of pH and temperature on the global compactness, structure, and activity of cellobiohydrolase Cel7A from Trichoderma harzianum

Colussi, Francieli; Garcia, Wanius; Rosseto, Flavio Rodolfo; Soares de Mello, Bruno Luan; de Oliveira Neto, Mario; Polikarpov, Igor
Fonte: SPRINGER; NEW YORK Publicador: SPRINGER; NEW YORK
Tipo: Artigo de Revista Científica
Português
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69.623525%
Due to its elevated cellulolytic activity, the filamentous fungus Trichoderma harzianum (T. harzianum) has considerable potential in biomass hydrolysis application. Cellulases from Trichoderma reesei have been widely used in studies of cellulose breakdown. However, cellulases from T. harzianum are less-studied enzymes that have not been characterized biophysically and biochemically as yet. Here, we examined the effects of pH and temperature on the secondary and tertiary structures, compactness, and enzymatic activity of cellobiohydrolase Cel7A from T. harzianum (Th Cel7A) using a number of biophysical and biochemical techniques. Our results show that pH and temperature perturbations affect Th Cel7A stability by two different mechanisms. Variations in pH modify protonation of the enzyme residues, directly affecting its activity, while leading to structural destabilization only at extreme pH limits. Temperature, on the other hand, has direct influence on mobility, fold, and compactness of the enzyme, causing unfolding of Th Cel7A just above the optimum temperature limit. Finally, we demonstrated that incubation with cellobiose, the product of the reaction and a competitive inhibitor, significantly increased the thermal stability of Th Cel7A. Our studies might provide insights into understanding...

Trichoderma harzianum expressed sequence tags for identification of genes with putative roles in mycoparasitism against Fusarium solani

Steindorff, Andrei Stecca; Silva, Roberto do Nascimento; Guedes Coelho, Alexandre Siqueira; Nagata, Tatsuya; Noronha, Eliane Ferreira; Ulhoa, Cirano Jose
Fonte: ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE; SAN DIEGO Publicador: ACADEMIC PRESS INC ELSEVIER SCIENCE; SAN DIEGO
Tipo: Artigo de Revista Científica
Português
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69.623525%
The plant pathogen Fusarium solani causes a disease root rot of common bean (Phaseolus vulgaris) resulting in great losses of yield in irrigated areas of the Southeast and Midwest regions of Brazil. Species of the genus Trichoderma have been used in the biological control of this pathogen as an alternative to chemical control. To gain new insights into the biocontrol mechanism used by Trichoderma harzianum against the phytopathogenic fungus, Fusarium solani, we performed a transcriptome analysis using expressed sequence tags (ESTs) and quantitative real-time PCR (RT-qPCR) approaches. A cDNA library from T. harzianum mycelium (isolate ALL42) grown on cell walls of F. solani (CWFS) was constructed and analyzed. A total of 2927 high quality sequences were selected from 3845 and 37.7% were identified as unique genes. The Gene Ontology analysis revealed that the majority of the annotated genes are involved in metabolic processes (80.9%), followed by cellular process (73.7%). We tested twenty genes that encode proteins with potential role in biological control. RT-qPCR analysis showed that none of these genes were expressed when T. harzianum was challenged with itself. These genes showed different patterns of expression during in vitro interaction between T. harzianum and F. solani. (C) 2012 Elsevier Inc. All rights reserved.; FINEP; FINEP; National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) (FINEP/CT-AGRO/Acao) [01.07.0551.00...

Caracterização bioquímica, biofísica e estrutural da Celobiohidrolase I de Trichoderma harzianum envolvida na hidrólise da biomassa lignocelulósica; Biochemistry, biophysics and structural characterization of cellobiohydrolase I from Trichoderma harzianum involved in the hydrolysis of lignocellulosic biomass

Colussi, Francieli
Fonte: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP Publicador: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
Tipo: Tese de Doutorado Formato: application/pdf
Publicado em 01/10/2012 Português
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70.2059%
Devido à sua importante atividade celulolítica, o fungo Trichoderma harzianum possui um grande potencial de aplicação na hidrólise da biomassa. No entanto, as celulases deste fungo filamentoso ainda não foram caracterizadas em profundidade. A celobiohidrolase I (CBHI) é a principal enzima celulolítica produzida por Trichoderma sp. e atualmente é uma das celulases mais investigadas para aplicações de biocombustíveis. A CBHI hidrolisa celulose cristalina à unidades solúveis de celobiose, o que a torna uma enzima chave para a produção de açúcares fermentáveis a partir da biomassa. O objetivo deste trabalho foi purificar e caracterizar a CBHI de Trichoderma harzianum (ThCBHI) bioquímica, biofísica e estruturalmente. Primeiramente foi estabelecido um protocolo de purificação eficiente da proteína a partir da expressão homóloga no fungo. A caracterização bioquímica ThCBHI mostrou que a proteína possui uma massa molecular de 66 kDa, pI de 5,23 e o pH e a temperatura de atividade ótima foram 5,0 e 50 ºC, respectivamente. A influência do pH e temperatura sobre as estruturas secundárias e terciárias e atividade enzimática da ThCBHI foram analisados por espectroscopia de CD, fluorescência e SAXS, e os resultados mostraram que as perturbações de pH e de temperatura afetam a estabilidade por dois mecanismos diferentes. As variações de pH podem modificar a protonação dos resíduos...

Filtration enrichment method for isolation of auxotrophic mutants of Trichoderma harzianum rifai

Cassiolato, Ana Maria R.; Melo, Itamar Soares de
Fonte: Sociedade Brasileira de Microbiologia Publicador: Sociedade Brasileira de Microbiologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 43-46
Português
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69.63865%
A obtenção de marcas genéticas, quer sejam para resistência a drogas, quer para auxotrofia, é uma etapa trabalhosa mas importante em pesquisa genética. Esse trabalho visou a obtenção de mutantes auxotróficos de Trichoderma harzianum utilizando-se a técnica de enriquecimento por filtração. A técnica mostrou-se superior à técnica convencional de isolamento total. Doze mutantes auxotróficos obtidos foram testados quanto a estabilidade, crescimento e resistência ao fungicida benomil. Eles apresentaram taxas de crescimento e esporulação comparáveis à linhagem parental e dois mutantes foram resistentes a benomil em uma concentração de 500µg/ml.; The isolation of genetic markers, like drug resistance and auxotrophy, is a laborious but important step in genetic research. The isolation of auxotrophic mutants of Trichoderma harzianum using the filtration enrichment technique was more effective than using the total isolation technique. Most of 12 auxotrophic mutants exhibited similar growth rate and higher sporulation when compared with the wild type, but only two mutants (TWS-410 and TW5-523) could grow in 500µg/L of benomyl.

Agaricus blazei as a Substrate for the Production of β-1,3-Glucanase by Trichoderma harzianum Rifai

Carneiro, Andréia A.J.; Giese, Ellen C.; Barbosa, Aneli M.; Gomes, Eleni; Da Silva, Roberto
Fonte: Universidade Estadual Paulista Publicador: Universidade Estadual Paulista
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: 341-346
Português
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69.42456%
Extracellular β-1,3-glucanase was produced by Trichoderma harzianum Rifai cultivated in the Agaricus blazei (Agaricus brasiliensis) extract as a substrate in submerged fermentation. A 22-central composite factorial design was developed using the time of culture (x1/day) and Agaricus blazei extract concentration (x2/(g/L)) as variables, and the results were analyzed using response surface methodology (RSM). The results showed that the Agaricus blazei extract concentration was the most important variable in the production of β-1,3-glucanase, and the maximum β-1,3-glucanase activity (0.77 U/mL) was obtained in one day of cultivation. The β-glucan present in the cell wall of Agaricus blazei mushroom proved to be a good substrate for inducing the production of specific β-1,3-glucanase by Trichoderma harzianum Rifai.

Produção de beta-glucanases por Trichoderma harzianum Rifai para obtenção gluco-oligossacarídeos a partir de botriosferana

Giese, Ellen Cristine
Fonte: Universidade Estadual Paulista (UNESP) Publicador: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
Tipo: Tese de Doutorado
Português
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69.623525%
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP); Pós-graduação em Engenharia e Ciência de Alimentos - IBILCE; As β-glucanas fúngicas apresentam uma série de respostas biológicas. Estas glucanas apresentam baixa solubilidade em meio aquoso, sendo necessário fragmentá-las em moléculas de menor peso molecular. O Botryosphaeria rhodina MAMB-05 é um ascomiceto ligninolítico produtor de uma β-(1→3)(1→6)-glucana denominada botriosferana (EPS). Estudos preliminares demonstraram que o fungo Trichoderma harzianum Rifai é capaz de crescer em EPS como única fonte de carbono e de produzir β-glucanases específicas. As condições para a produção de -1,3-glucanases pelo T. harzianum Rifai em fermentador de bancada utilizando EPS como única fonte de carbono foram otimizadas através do uso de um planejamento fatorial e análise por superfície de resposta, o qual mostrou que a produção máxima de -1,3-glucanases ocorreu em 5 dias de cultivo, com pH inicial igual a 5,5 e com aeração de 1,5 vvm. As enzimas do complexo -glucanolítico extracelular foi parcialmente purificado e utilizado para a hidrólise de botriosferana, laminarina, paramilo e pustulana. Duas frações com atividade para -glucanase (F-I e F-II) foram obtidas a partir da cromatografia de filtração em gel...

Avaliação do etanol como agente precipitante de glicosil hidrolases produzidas por Trichoderma harzianum P49P11; Ethanol precipitation of glycosyl hydrolases produced by Trichoderma harzianum P49P11

Mayra Alejandra Mariño Bohórquez
Fonte: Biblioteca Digital da Unicamp Publicador: Biblioteca Digital da Unicamp
Tipo: Dissertação de Mestrado Formato: application/pdf
Publicado em 17/02/2014 Português
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69.63865%
O crescente interesse pelo aproveitamento da matéria-prima renovável vem demandando novas tecnologias eficientes na produção de etanol de segunda geração a fim de reduzir os altos custos associados com as enzimas envolvidas na sacarificação. Este estudo teve como objetivo principal concentrar, através de precipitação com etanol, glicosil hidrolases responsáveis pelas atividades de endoglucanase, β-glicosidase, FPase e xilanase produzidas por Trichoderma harzianum P49P11. As variáveis de precipitação testadas foram temperatura, concentração de etanol e pH do fermentado. O etanol demonstrou potencial para recuperar ao redor de 98% da atividade de xilanase correspondente a 17,6 U/mL através de precipitações com 90% de etanol (v/v) em todas as temperaturas testadas (5,0, 15 e 25°C) e pH 5,0. Sob estas mesmas condições de precipitação, 90% de etanol (v/v) e pH 5,0, porém a 5°C, foi obtida a máxima recuperação da atividade de celulase (FPase) sendo 77% correspondente a 0,08 U/mg. Esta última formulação causou precipitação instantânea. Desta forma, a precipitação com etanol pode ser considerada uma técnica eficiente para concentrar xilanase e, em certa medida, para o complexo de celulase.; Growing interest in the use of renewable raw materials for the production of second generation ethanol has led to the need of new efficient technologies to reduce the high costs associated with saccharification enzymes. This study aimed to concentrate by ethanol precipitation glycosil hydrolases responsible for FPase...

Análise do secretoma da interação entre Trichoderma Harzianum e os estagios de desenvolvimento do fitopátogeno Sclerotinia Sclerotiorum

Troian, Rogério Fraga
Fonte: Universidade de Brasília Publicador: Universidade de Brasília
Tipo: Tese
Português
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69.92428%
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2014.; Trichoderma harzianum tem recebido considerável atenção como potencial agente de controle biológico, agindo como um micoparasita contra diversos fitopatógenos habitantes do solo, incluindo Sclerotinia sclerotiorum. O objetivo deste estudo foi vizualizar por microscopia eletrônica de varredura (MEV), a interação entre T. harzianum e S. sclerotiorum, assim como mapear e identificar as proteínas secretadas por T. harzianum quando cultivado na presença de parede celular, apotécio e escleródio de S. sclerotiorum. Nos testes de interação por MEV, T. harzianum provou ser um potente antagonista de S. sclerotiorum, mostrando que as hifas do antagonista penetraram nas estruturas do fitopatógeno. Posteriomente foram construídos os mapas bidimensionais permitindo a visualização das diferentes proteínas secretadas de T. harzianum quando cultivadas na presença de diferentes etapas da vida de S. sclerotiorum sendo que um total de 139 spots foram analisados, e destes foram identificados 63. Das proteínas identificadas no secretoma 5 são exclusivas quando cultivadas em meio contendo apotécio...

Biocontrol potential of salinity tolerant mutants of Trichoderma harzianum against Fusarium oxysporum

Mohamed,Hassan Abdel-Latif A.; Haggag,Wafaa Mohamed
Fonte: Sociedade Brasileira de Microbiologia Publicador: Sociedade Brasileira de Microbiologia
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/06/2006 Português
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69.623525%
Exposing a wild-type culture of Trichoderma harzianum to gamma irradiation induced two stable salt-tolerant mutants (Th50M6 and Th50M11). Under saline conditions, both mutants greatly surpassed their wild type strain in growth rate, sporulation and biological proficiency against Fusarium oxysporum, the causal agent of tomato wilt disease. Tolerant T. harzianum mutants detained a capability to grow and convinced sporulation in growth media containing up to 69 mM NaCl. In comparison with their parent strain, characterization of both mutants confirmed that they have reinforced contents of proline and hydroxyproline, relatively higher sodium content compared to potassium, calcium or magnesium contents, higher level of total phenols. Electrophoretic analysis of total soluble proteins in the salt tolerance mutant Th50M6 showed different bands accumulated in response to 69 mM NaCl. Data also showed that mutants produce certain active metabolites, such as chitinases, cellulases, beta-galactosidases, as well as, some antibiotics i.e., trichodermin, gliotoxin and gliovirin. Trichoderma mutants significantly reduced wilt disease incidence and improved yield and mineral contents of tomato plants under both saline and non-saline soil conditions...

Construção e análise de uma biblioteca de cDNA de Trichoderma harzianum crescido na presença de parede celular de Fusarium solani; Construction and analisys of a cDNA library of Trichoderma harzianum grown in presence of Fusarium solani cell wall

STEINDORFF, Andrei Stecca
Fonte: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Mestrado em Biologia; Ciências Biolóicas Publicador: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Mestrado em Biologia; Ciências Biolóicas
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
Português
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70.273604%
Species of Trichoderma are commercially applied as biological control agents against plant fungal pathogens. Their action is based on a set of events, such as the production of antifungal metabolites, competition for space and nutrients and mycoparasitism. However the biocontrol mechanism of the interaction between Trichoderma harzianum and Fusarium solani is not yet understanded at the transcriptome level. This study aimed to initiate the preliminary development of an expressed sequence tag (EST) database for Trichoderma harzianum and thereby gain potentially useful information on Trichoderma gene sequences in order to elucidate the integrated biocontrol mechanism. Partial sequencing of anonymous cDNA clones is a widely used technique for gene identification. A directional cDNA library has been constructed from mycelium of Trichoderma harzianum grown on cell wall isolated from Fusarium solani. 3984 clones have been randomly selected, subjected to single-pass sequencing from the 5 end of the vector, and identified by sequence similarity searches against gene sequences in GenBank fungal database. Of the 3984 mycelium clones, 40.8% exhibit similarity to known genes. Analysis of the identified clones indicated sequence similarity to a broad diversity of genes encoding proteins such as enzymes...

Análise do secretoma do fungo Trichoderma harzianum crescido em presença de glicose ou parede celular de Fusarium solani; Analysis of the secretome of Trichoderma harzianum grown in the presence of glucose or cell walls of Fusarium solani

RAMADA, Marcelo Henrique Soller
Fonte: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Mestrado em Biologia; Ciências Biolóicas Publicador: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Mestrado em Biologia; Ciências Biolóicas
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
Português
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70.134487%
Trichoderma harzianum is a saprophytic fungus, known for its potential as a biological control agent of different phytopathogens that causes losses in crops. Its action is based on different mechanisms like volatile and non-volatile antibiotics production, competition for nutrient and space, production of hydrolytic enzymes and mycoparasitism. Fusarium solani is the agent of bean dry root rot, and is responsible for significant losses. This work sought to analyze and identify secreted proteins from T. harzianum grown in the presence of F. solani cell wall, in an attempt to obtain new insights on biocontrol.In the dual culture test, T. harzianum proved to be a potent antagonist of F. solani. Some differences in the secreted proteins profile and final medium pH were observed when T. harzianum was grown in TLE medium containing glucose and in TLE and Minimum medium containing the cell wall of the phytopathogen. 33 proteins from 18 different genes were identified. The protein Sm1 was identified and secreted in all growth conditions. Many hydrolytic enzymes related to mycoparasitism, like endochitinases, β-1,3, β-1,6-glucanases, proteases and α-1,3-glicanases, were identified and among the proteases, a hypothetical metalocarboxipeptidase and a serine subtilisin-like never described for T. harzianum. Some enzymes with unkown roles in the mycoparasitism...

Produção e caracterização bioquímica de uma fosfatase ácida de Trichoderma harzianum (ALL42); Production and biochemistry caracterization of the acid phosphatase Trichoderma harzianum (ALL42)

SOUZA, Amanda Araujo
Fonte: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Mestrado em Biologia; Ciências Biolóicas Publicador: Universidade Federal de Goiás; BR; UFG; Mestrado em Biologia; Ciências Biolóicas
Tipo: Dissertação Formato: application/pdf
Português
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70.10123%
Trichoderma harzianum is a saprophytic fungus, known for its potential as a biological control agent of different phytopathogens that causes losses in crops. Its action is based on different mechanisms like volatile and non-volatile antibiotics production, competition for nutrient and space, production of hydrolytic enzymes and mycoparasitism. This fungus also plays an important role in the release of carbon, nitrogen and phosphorus from insoluble macromolecules to the medium, favoring the growth of plants. Phosphorus is a limiting nutrient for plant growth, however, over 80% of the phosphorus applied to the soil, it becomes unavailable, due to its adsorption, precipitation or conversion to organic form. One way to obtain phosphate compounds in soil is through the action of enzymes called phosphatases, which catalyze the hydrolysis of phosphate esters producing soluble phosphorus. High levels of acid phosphatase (ACP) were produced by Trichoderma harzianum ALL42. This study evaluated the ability of T. harzianumALL42produce acid phosphatases(ACPs) in minimal medium modified by varying the concentration of glucose and phosphate (KH2PO4). The results showed that the concentration of glucose and phosphate in the culture medium regulated the production of ACPs T. harzianum ALL42. Thisfungusproducedanacid phosphatase(ACPII) inculture mediumcontainingglucose0.5% and0.04% phosphate. Theenzymewaspartiallypurifiedby hydrophobic interaction chromatography on Phenyl Sepharose. A typical procedure provided 2...

Matrices de soporte como conservador inerte de Trichoderma harzianum y Pseudomonas fluorescens

Rodríguez Rodríguez, Gabriel Hernando
Fonte: Pontifícia Universidade Javeriana Publicador: Pontifícia Universidade Javeriana
Tipo: bachelorThesis; Trabajo de Grado Pregrado Formato: Pdf
Português
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69.54009%
En el presente trabajo se evaluaron tres matrices como soporte inerte para microorganismos, las matrices empleadas fueron: perlas de alginato de calcio, maltodextrinas y arroz molido, con el fin de almacenar y conservar Trichoderma harzianum y Pseudomonas fluorescens, para lograrlo, se realizaron diferentes pruebas a las matrices observando el comportamiento de cada microorganismo en cada uno de los tiempos empleados en las pruebas. En la preparación de las perlas de alginato se evaluó la concentración de alginato de sodio y cloruro de calcio sobre las propiedades físicas de la perla, teniendo presente que la concentración apropiada del alginato es al 1%. De igual forma, fueron evaluados los microorganismos en diferentes concentraciones. El ensayo de la maltodextrina se realizó mediante una mezcla del ingrediente activo T. harzianum con maltodextrina, manejando una proporción de 40%-60% respectivamente. Durante la prueba fueron evaluados la concentración de esporas, pureza, viabilidad, humectabilidad y pH, siendo estas unas pruebas estandarizadas y empleadas por el laboratorio de Bioecologicos, es importante resaltar el hecho que éstas son pruebas avaladas por el (ICA) Instituto Colombiano Agropecuario.; In this study, three matrices were evaluated immobilization matrix for micro arrays such as: calcium alginate beads...

Identification of Trichoderma harzianum lip2 gene by HE-TAIL PCR

Jorge, Lurdes; Monte, Enrique; Gonzalez, Francisco J.; Choupina, Altino
Fonte: Instituto Politécnico de Bragança Publicador: Instituto Politécnico de Bragança
Tipo: Conferência ou Objeto de Conferência
Português
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69.478022%
Trichoderma harzianum is a widespread soil fungus, known as a biocontrol agent against soil borne plant pathogens. Its biological control against plant fungi pathogens is based on different mechanisms, namely the production of several lytic enzymes. In T. harzianum several glucanases, cellulases, chitinases and proteases, has been identified but little is known about its lipolytic system. The aim of this work was to achieve the complete elucidation of T. harzianum lip2 by HE-TAIL PCR (High-Efficiency Thermal Asymetric Interlaced PCR), a method described as efficient to identify flanking regions from short known DNA sequences. From a cDNA library of T. harzianum CECT 2413, obtained by NewBiotechnic, it has been selected an EST who showed lipase homology in agreement with the program FASTA: EST-1279. DNA sequencing was performed using an ABI 373 automated sequencer. After two sequencing rounds, EST-1279 had 1168bp, and a great homology (1,8e-80 ) with a hypothetical lipase of Fusarium graminearum. Comparison between two sequences, suggested that still are lacking 300bp of the beginning of the ORF. In order to determine the lacking bases, it was used an HE-TAIL PCR, that seemed suitable to the problem resolution. Degenerated 16bp primers R1 (5'- NGTCGASWGAMAWGAA-3')...

Efecto de la aplicación de Trichoderma harzianum en la descomposición de la materia orgánica que compone el fieltro

Hermosilla Heini, Evelyn Denisse
Fonte: Universidad de Chile Publicador: Universidad de Chile
Tipo: Tesis
Português
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69.63865%
Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Fitotecnia; Uno de los problemas más importantes de manejo dentro de un green de golf, es el manejo del fieltro, que se presenta como una capa entre la parte verde de la planta y la superficie del suelo. La presencia del fieltro le da al green características poco deseables a la hora de jugar, también le confiere una mayor susceptibilidad a plagas y enfermedades, baja conductividad hidráulica, mayor susceptibilidad a estrés por frío o calor, etc. Como la capa de fieltro está mayoritariamente compuesta por tejido en descomposición, se planteó la hipótesis que al aplicar Trichoderma harzianum esta capa disminuiría su grosor ya que este hongo es capaz de descomponer la materia orgánica presente en el fieltro. El estudio se realizó en un vivero de pasto de green en el Prince of Wales Country Club, en la Comuna de La Reina desde Noviembre del 2009 a Enero del 2010, utilizando un diseño experimental de bloques completos al azar con cinco repeticiones. El objetivo es evaluar diferentes dosis de aplicación de Trichoderma harzianum en la descomposición de la materia orgánica y la reducción de la capa de fieltro, por lo que se probaron dos dosis del producto comercial HARZTOP más un testigo y se realizaron tres mediciones: altura de capa de fieltro...

Variabilidade entre isolados de Trichoderma harzianum: I - Aspectos citológicos; Variability among Trichoderma harzianum isolates: I - Cytological aspects

Peres, E.; Melo, I.S. De
Fonte: Universidade de São Paulo. Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz Publicador: Universidade de São Paulo. Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz
Tipo: info:eu-repo/semantics/article; info:eu-repo/semantics/publishedVersion; ; ; ; ; Formato: application/pdf
Publicado em 01/04/1995 Português
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69.90573%
Objetivou-se neste trabalho estudar a variabilidade de isolados selvagens de Trichoderma harzianum baseado nas características culturais e citológicas. Observaram-se o tamanho dos fialosporos, número de núcleos por fialosporos e crescimento e esporulação em meio de malte-ágar. Pelos resultados aqui encontrados foi possível reconhecer que há variação entre os isolados selvagens da espécie T. harzianum. Com relação ao número de núcleos, verificou-se uma variação de 1 a 3 núcleos por fialosporos. Também observou-se padrões diferenciais de crescimento e morfologia da colônia. Mais de 50% dos isolados atingiram o máximo de crescimento em 48 horas.; This study is based largely on morphological and cultural characters of Tríchoderma harzianum isolates. It were observed the size of phialospores, mycelial growth and sporulation on malt extract agar and nuclei number per phialospores, stained with Giemsa. A x 100 oil immersion len was used in examining and in measuring phialospores. Based on the size of phialospores, it was possible recognize that there is variaton among the wild isolates for the specie T. harzianum. Also, with relation to mycelial growth and sporulation can itself distinguish from one another different pattern. Up to 50% of isolates had maximum growth in 48 hours. The nuclei number of 1 to 3 per phialospore was observed.

Native isolates of Trichoderma harzianum inducting resistance to Zymoseptoria tritici onwheat plants

Stocco,Marina C; Mansilla,Andrea Y; Mónaco,Cecilia I; Segarra,Carmen; Lampugnani,Gladys; Abramoff,Cecilia; Marchetti,María F; Kripelz,Natalia; Cordo,Cristina C; Consolo,Verónica F
Fonte: Boletín de la Sociedad Argentina de Botánica Publicador: Boletín de la Sociedad Argentina de Botánica
Tipo: Artigo de Revista Científica Formato: text/html
Publicado em 01/09/2015 Português
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Trichoderma harzianum inducting resistance to Zymoseptoria tritici. Septoria tritici blotch is endemic in the wheat growing cultivated areas of Argentina, which impacts in the crop yield. One management strategy is to use biocontrol agents. The objective of this work was to determine the effectiveness of Trichoderma spp. isolated from soils of different growing regions, as antagonist and characterize the T. harzianum effect throughout the proteolytic activity of the serine protease in the wheat plant. To determine the antagonistic capacities of Trichoderma spp. against Zimoseptoria tritici, wheat plants were grown from seeds coated with each of the ninety isolated Trichoderma. Antagonism was assessed 21 days after inoculation by the capacity of each Trichoderma spp. isolate to restrict the progress of the disease. To measure the increasing proteolytic activity, ten isolated T. harzianum characterized by their inhibitory effect over the pathogen, were chosen. Four isolates of the antagonist (strain 2 and 8, from Los Hornos and 129 and 141 from Manfredi localities) simultaneously decreased the pycnidial coverage percentage with a noted increasing of the serine-protease activity in the susceptible wheat cultivar. This behavior is associated to a biochemical mechanism of defense with an early systemic effect.